ELISA試劑盒操作使用時(shí)實(shí)驗(yàn)室需留意這幾點(diǎn)

更新時(shí)間：2022-01-24

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　　ELISA試劑盒檢測(cè)原理：采用免疫熒光定量檢測(cè)技術(shù)、免疫層析法。用于檢測(cè)人體全血、血漿樣本中D-二聚體的含量。將血液樣本和樣品緩沖液在緩沖液瓶中進(jìn)行混合，緩沖液中的熒光標(biāo)記抗D-二聚體抗體和血液中的D-二聚體抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。當(dāng)混合物樣本被加入到檢測(cè)卡的加樣孔后，在層析作用下沿著硝酸纖維素膜向前擴(kuò)散，該復(fù)合物被固定在檢測(cè)線上的D-二聚體抗體捕獲，血液樣本中的D-二聚體越多，檢測(cè)線上聚集的復(fù)合物越多，熒光抗體的信號(hào)強(qiáng)度反映了被捕獲的D-二聚體數(shù)量，通過(guò)干式免疫熒光定量分析儀處理，能夠檢測(cè)血液樣本中D-二聚體的濃度。

　　ELISA試劑盒操作使用時(shí)實(shí)驗(yàn)室需留意這幾點(diǎn)：

　　1. 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，調(diào)查其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否良好。

　　2. 酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定。然后再固定其它條件或采納“方陣法”在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度。

　　3.酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體有潛在的致癌作用，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。ELISA試劑盒底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反應(yīng)。

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