大鼠Elisa試劑盒樣品處理及保存方法

更新時(shí)間：2022-09-26

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　　大鼠Elisa試劑盒是通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)特定物質(zhì)的試劑盒，試劑盒中會(huì)有不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，在酶標(biāo)條中通過(guò)固相的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶作用的底物反應(yīng)可形成標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而進(jìn)行試驗(yàn)樣品的測(cè)定。

　　大鼠Elisa試劑盒的樣品收集、處理及保存方法：

　　1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

　　2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

　　3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

　　5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　大鼠Elisa試劑盒操作步驟：

　　1.通過(guò)計(jì)算并確定一次性實(shí)驗(yàn)所需的板條數(shù)，取出所需板條放置在框架內(nèi)，暫時(shí)用不到板條請(qǐng)放回鋁箔袋密封，保存于4℃。

　　2.建議設(shè)置本底較正孔，即空白孔，設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實(shí)驗(yàn)均需做標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照并畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　3.分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品（100u1/孔）加入相應(yīng)孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育120分鐘。對(duì)于血清或血漿標(biāo)本，請(qǐng)加入50u1樣本分析緩沖液后加50u1標(biāo)本，如稀釋量大，請(qǐng)將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。

　　4.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　5.加入生物素化抗體工作液（100u1/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，室溫孵育60分鐘。

　　6.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　7.加入酶結(jié)合物工作液（100u1/孔）。用封板膠紙封住反應(yīng)孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　8.洗板5次，且置厚吸水紙上拍干。

　　9.加入顯色劑TMB100u1/孔，避光室溫孵育20分鐘。

　　10.加入終止液50u1/孔，混勻后即刻測(cè)量0D450值。