黃尿酸（xanthurenic acid）ELISA試劑盒（競爭法）的原理與應(yīng)用是什么？

黃尿酸（xanthurenic acid）ELISA試劑盒（競爭法）的原理與應(yīng)用可總結(jié)如下：

一、檢測原理

采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，預(yù)先包被黃尿酸抗原的微孔板中依次加入樣本、標準品及HRP標記的競爭抗原，經(jīng)溫育洗滌后，通過TMB顯色反應(yīng)（藍色→黃色）實現(xiàn)檢測。樣本中黃尿酸濃度與顏色深度呈負相關(guān)，最終通過測定450nm處OD值計算濃度.

二、樣本處理與保存

1. ?樣本類型?：支持血清、血漿、唾液、尿液等。

2. ?處理方法?：

• 血清需避免細胞刺激，3000rpm離心10分鐘分離；

• 其他液體樣本需去除雜質(zhì)后分裝凍存（-20℃或-80℃）。

五、注意事項

1. ?保存條件?：未開封試劑盒需避光保存于2-8℃，開封后需按組分要求分裝；

2. ?適用性驗證?：建議預(yù)實驗確認樣本稀釋比例及檢測線性范圍；

3. ?檢測靈敏度?：競爭法通常靈敏度為10-50pg/mL，需結(jié)合超靈敏試劑盒（如化學(xué)發(fā)光法）檢測低濃度樣本。

文獻支持：

The Gut Microbiota-Xanthurenic Acid-Aromatic Hydrocarbon Receptor Axis Mediates the Anticolitic Effects of Trilobatin

影響因子：17.521

結(jié)果判斷 

1. 15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值； 

2. 百分結(jié)合率計算：設(shè)S0管計數(shù)為B0，各標準管或樣品管計數(shù)為B，非特異管計數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率 計算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3. logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4. 將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除，為標準點的百分結(jié)合率，在log-logit坐標紙上繪圖。 

5. Log-logit雙對數(shù)標準曲線：坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位，第二個1-9表示 為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比（1-99），即各標準吸光值的百 分結(jié)合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上，同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣 品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率，再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點，此點對應(yīng)的橫坐標濃度即 為樣品的濃度，無須換算。 

6. 人工處理：以標準濃度取log值為橫坐標，對應(yīng)的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫 坐標，對應(yīng)的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線（理想化時是一條直線）。根據(jù)待測樣品 的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度 值。 

7.8. 9. 自動處理：使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式，由電腦自動計算得出結(jié)果。 敏感度：0.1 PPb。

試劑盒性能 

1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于 0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于 0.1 PPb。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。